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La Microbiologia

victor manuel
Tecnología médica unachi, panamá
Escrito por Victor Manuel Jaen Burke
el 01/10/2010

La microbiología es una ciencia interesante, elaborar medios de cultivos que nos permitan verlas crecer como si fueran plantas para luego aplicarles los diferentes antibióticos es algo que me parece maravilloso.

Esto tienen sus desventajas puesto que muchos médicos han abusado indiscriminadamente del uso de estos antibióticos creando lo que se llama resistencia bacteriana, o sea que la bacteria se va volviendo inmune a estos medicamentos y es necesario aumentar las dosis o cambiar la estructura del mismo para poder erradicar estos microorganismos.

Muchas bacterias se convierten en resistentes por la adquisición de genes

Es importante que se den docencias continuas a los médicos, tecnólogos y microbiólogos para utilizar aquellos medicamentos en una dosis apropiada para evitar dicha resistencia.

Les puedo mencionar un ejemplo de resistencia y es la causada a los estafilococos ( un tipo de bacterias ) que sufren una modificación de las Proteínas de Enlace con la Penicilina (PBP) de los estafilococos resistentes a la oxacilina (llamados estafilococos "Meti-R").

O sea que los Neumococos son resistentes a la penicilina. Por lo que este medicamento tan efectivo para otras bacterias y que tiene años de haberse descubierto no se puede colocar a un bebe o niño con esta enfermedad.

Luis Arturo Ayarza Aguirre
Lic en biologia, msc bioquimic univer...
Escrito por Luis Arturo Ayarza Aguirre
el 10/10/2010

Una parte interesante en la microbiología es las pruebas bioquímicas : es muy importante que las describamos y estudiemos en este post.

Fabiola Saldaña
Tecnologia medica univesidad nacional
Escrito por Fabiola Saldaña
el 13/11/2010

Las pruebas Bioquímicas si son una parte muy importante en la microbiología porque con el uso correcto de las mismas ante una bacteria podemos clasificarla y asi determinar con que clase de bacteria estamos tratando para si aplicar la prueba de suceptibilidad y dar un asi un diagnostico al médico y que el mismo proceda a dar una cura al paciente.
La pruebas Bioquímicas no son mas que como su palabra lo dice pruebas que se le realizan a microorganismos para var como su metabolismo es capaz de utilizar diferentes rutas metabolicas para que así cause daños en el organismo invasor.
Entre estas podemos hablar de:

Medio con Citrato de Simmons

Principio:

Determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono para el metabolismo provocando alcalinidad. La utilización de citrato como única fuente de carbono es una prueba útil en la identificación de enterobacterias. La utilización de citrato como única fuente de carbono se detecta mediante el crecimiento y la alcalinización del medio. Este aumento de pH se visualiza con el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino.

Procedimiento:

· Se inocula el agar inclinado en una sola estría en el pico.

· Incubar a 37°C por 24 – 48 horas.

Interpretación:

Positiva:

· Azul intenso

Entre las enterobacterias estas características se dan en los siguientes géneros: Enterobacter , Klebsiella , Serratia , Citrobacter y algunas especies de Salmonella .

Negativa:

· Verde claro, azul claro

Sin embargo, Escherichia , Shigella , Salmonella typhi y Salmonella paratyphi son incapaces de crecer con esos nutrientes.

Prueba de Urea

Principio:

El indicador de pH utilizado es el rojo fenol. Esta prueba detecta la presencia de la enzima ureasa en el metabolismo bacteriano, la cual al hidrolizar urea forma productos amoniaco que alcalinizan el medio y se evidencia con el cambio de color del medio desde un amarillo pálido hasta un rojo fucsia.

Procedimiento:

· Con el asa de platino transfiera una porción de cultivo puro proveniente de un medio sólido.

· Agitar suavemente el tubo para lograr la suspensión de bacterias.

· Incube a 37ºC por 24 horas.

Interpretaciones:

Positivo:

La hidrólisis de la urea es indicada por un cambio de color de amarillo (pH 6. 8) a un rojo cereza (pH 8. 1). La liberación de amonio eleva el pH. (Klebsiella, Proteus).



Negativo:

· Color amarillo.( E. Coli, Providencia).



Prueba SIM (sulfuro indol motilidad)

Principio:

La prueba de indol se emplea para detectar la presencia de la enzima triptofanasa en bacterias, que degrada el aminoácido triptófano a indol. Al añadir al medio SIM el reactivo de Kovacks o de Erlich que contiene p-dimetilaminobenzaldehído, reacciona tanto con el indol como con el triptófano produciendo compuestos de color rojizo. Para evitar la interferencia del triptófano, el reactivo está disuelto en alcohol isoamílico inmiscible en agua. A diferencia del triptófano, el indol es soluble en el alcohol y sólo este compuesto reaccionará con el aldehído produciendo el anillo coloreado característico de esta prueba.

Procedimiento:

· Inocular el caldo con el organismo en estudio.

· Incubar a 35 - 37°C durante 24 horas.

· Al finalizar este período, añadir 5 gotas de reactivo de Kovacs por la pared interior del tubo.

Interpretación:

Positiva:

· Anillo rosa en la superficie. (Escherichia coli)

Negativa:

· Incoloro (Klebsiella pneumoniae)

Medio con TSI (triple sugar iron)

Principio:

Medio diferencial complejo (de color rojo) compuesto por 3 azúcares: 10% lactosa, 10% sucrosa y 1% dextrosa y un ligador que es en este caso el hierro. La siembra se realiza tanto en la superficie del agar (aerobiosis) como en la profundidad de éste (anaerobiosis).
Medio K (alcalino) de color rojo. Medio A (ácido) de color amarillo.


K/A
Si la bacteria metaboliza sólo la glucosa: en la superficie la utilizará por vía respiratoria, y donde la tensión de oxígeno disminuya lo suficiente, empleará una pequeña proporción por vía fermentativa. Esto generará una pequeña cantidad de ácidos que serán neutralizados por las aminas derivadas de la decarboxilación oxidativa de las proteínas.
Como resultado, el medio mantendrá su color rojo en la superficie, al no haber cambiado de pH. Por el contrario, las bacterias crecidas en la profundidad emplearán desde el primer momento la glucosa por vía fermentativa, generando ácidos que no serán neutralizados, provocándose un descenso del pH y el color del medio en el fondo del tubo cambiará a amarillo.


A/A
Si la bacteria, además fermenta lactosa: los ácidos producidos modificarán también el pH de la superficie del medio. Las aminas no son capaces de neutralizar la cantidad de ácidos producidos en esta fermentación, ya que la lactosa se encuentra en el medio a mayor concentración que la glucosa. El color del medio en la superficie cambiará a amarillo.


K/K
Si la bacteria es aerobia estricta (no fermentadora), el medio permanece de color rojo. Los azúcares son respirados, degradándose completamente hasta CO2, que se elimina y no modifica el pH.


A/A(g)
aparición de burbujas, rotura o elevación del agar del fondo del tubo.


K/A(H2S)
aparición de un precipitado de color negro en el fondo del tubo. Algunas bacterias respiradoras anoxobiónticas son capaces de emplear el tiosulfato sódio como aceptor final de electrones en la cadena transportadora. Este compuesto se reduce a ácido sulhídrico que reacciona con el hierro Fe2+ presente en el medio formando un precipitado negro de sulfuro de hierro.

Procedimiento:

· Se preparan en tubos poco inclinados y con bastante medio, inoculándolos por picadura en el centro del medio y realizando además una estría recta al salir sobre la superficie inclinada del medio.

· Inocular los tubos de TSI con punta (alambre recto).

· Incubar a 37°C durante 24 - 48 horas.

Interpretación:

· Pico alcalino/fondo alcalino: no hay fermentación de azucares. Característica de bacterias no fermentadoras como Pseudomonas sp.

· Pico alcalino/fondo ácido: Glucosa fermentada, lactosa ni sacarosa fermentadas. Shigella spp .

· Pico alcalino/fondo negro: Glucosa fermentada, ni lactosa ni sacarosa fermentada, producción de ácido sulfhídrico. Salmonela spp.

· Pico ácido/fondo ácido: Glucosa y lactosa y/o sacarosa fermentadas. Puede producirse SH2 o no. Escherichia coli.

A estos resultados se les agrega el resultado de la producción de gas.

Prueba de Catalasa distinguir Staphylococcus de Streptococcus

Principio:

Bacterias que viven en ambientes aerobios requieren de catalasa para convertir el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno molecular. Es positiva la prueba cuando se ponen en contacto una bacteria con actividad catalasa con H2O2 3% y se producen burbujas de oxígeno. Se emplea para diferenciar el género Staphylococcus (catalasa positivo) del género Streptococcus (catalasa negativo).

Procedimiento:

Método del portaobjetos (recomendado):

  • Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24 horas y colocar sobre un portaobjetos limpio de vidrio.
  • Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H2O2 al 30% sobre el microorganismo sin mezclarlo con el cultivo.
  • Observar la formación inmediata de burbujas (resultado positivo).
  • Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante.

Interpretación:

P ositiva:

Formación inmediata de burbujas bien visibles.

Negativo :

No hay formación de burbujas.

Prueba de Coagulasa para Staphylococcus

Principio:

Permite diferenciar Staphylococcus aureus (coagulasa positivo) del resto de especies de Staphylococcus (coagulasas negativos). La técnica en tubo detecta coagulasa libre y ligada. Mecanismo de acción de la coagulasa libre: procoagulasa (enzima extracelular bacteriana) reacciona con un factor activador presente en el plasma sanguíneo similar a la protrombina, dando lugar a un complejo análogo a la trombina (coagulasa propiamente dicha) que reacciona con fibrinógeno formando un coágulo de fibrina en ausencia de Ca2+. La coagulasa ligada o factor de agregación actúa directamente sobre el fibrinógeno y lo convierte en fibrina. No requiere la presencia de activadores plasmáticos.

Procedimiento:

1) Poner 0,5 ml de plasma en un tubo estéril.

2) Añadir una colonia grande pura y aislada.

3) Homogeneizar suavemente.

4) Incubar a 37ºC durante 4 horas.

5) Observar cada 30 minutos hasta las 4 horas.

Interpretación:

Positivo :

· Formación de un coágulo de plasma visible.

Negativo:

· Ausencia de un coágulo perfectamente formado.

Espero que les sea mi aporte sobre las pruebas bioquímicas. Me gustaría ampliar más el tema, pero sobre la utilización de los antibióticos y por qué muchas veces se contrarestan sus funciones.

Mayerlin Espinosa
Tecnologia medica universidad latina
Escrito por Mayerlin Espinosa
el 14/11/2010

en resumen :

Los ensayos bioquímicos tradicionalmente utilizados, llamadas pruebas bioquímicas convencionales, generalmente determinan la actividad de una vía metabólica (conjunto de reacciones químicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no.

Existen diferentes sistemas que facilitan la realización de tales ensayos, porque proponen el mejor conjunto de pruebas bioquímicas para la identificación de un grupo bacteriano, porque simplifican la interpretación de un resultado utilizando un valor numérico, porque proveen los reactivos listos para su uso o porque son totalmente automatizables.

Las pruebas o ensayos bioquímicos, son pruebas simples que se han desarrollado para demostrar en forma clara una determinada característica bioquímica como presencia o ausencia de una determinada actividad enzimática, grupo de enzimas o determinada vía metabólica, crecimiento a una determinada temperatura, crecimiento en presencia de inhibidores, etc. No significan de ninguna manera un estudio profundo del metabolismo bacteriano

Claudia Carlotti
Barcelona, España
Escrito por Claudia Carlotti
el 09/02/2016

Voy a sumarme a este debate, a ver si me podéis ayudar :-)

Tengo interés en esta materia y ¿Por qué no? Me gustaría profundizar más... Pero tengo algunas preguntas sobre que camino cursar para recibir formación profesional

Para los que tengáis experiencia ¿Me podrían asesorar sobre masters, oposiciones, postgrados, carreras universitarias u otras formaciones oficiales, cursos superiores o subvencionados?

¿Cuál es la mejor que puedo optar? ¿Alguna escuela en partícular?

Sobre todo que me podéis decir de los Masters microbiologia molecular ¿Realmente cumplen su cometido?

PD: España o formaciones a distancia u online