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Foro de Bioquímica



duda importante

Alex
Granada, España
Escrito por Alex Santos
el 05/05/2010

Para medir la concentracion de una proteina en un espectrofotometro... La longitud de onda que se utiliza para medir ese complejo cupro-proteico es de 546nm... Porque se utiliza esa longitud de onda y no otra?

y otra preguntilla: ese modo grafico de obtener el valor de una concentracion problema es el unico o habria otra forma mas rapida de hacerlo?

Cynthia Gabriela
Bioquímica facultad de bioquímica, quí...
Escrito por Cynthia Gabriela
el 09/05/2010

Hola Alex, para la medición de la concentración de cualquier compuesto por medio de la espectrofotometría se requiere una fuente de energía incidente de una longitud de onda específica para el compuesto en cuestión.

La longitud de onda es una caracteristica de la energía transmitida en forma de radiación electromagnética, es la razón entre velocidad de la onda y frecuencia.
La materia que se quiere analizar debe interactuar con la radiación electromagnética, la cual es absobida.

Lo que sucede es que el electrón del átomo en cuestión que se encuentra en estado fundamental (estable) puede ser promovido a un estado de mayor energía (la diferencia entre los dos niveles energéticos tiene una determinada longitud de onda). Si se aplica una energía (fotón) adecuada con esa longitud de onda que necesita el electrón para aumentar el nivel energético, el electrón será promovido al estado mayor de energía o "estado excitado" (transición electrónica). El estado excitado es inestable, y el átomo inmediatamente vuelve a su configuración en el estado fundamental (estable). Cuando el electrón retoma a su posición orbital estable emite energía radiante equivalente a la cantidad de energía inicialmente absorbida en el proceso de excitación.

La longitud de onda de la energía radiante emitida es caracteristica del elemento, por lo que está directamente relacionada con la transición electrónica ocurrida y por lo tanto depende de la estructura electrónica propia del elemento. La energía absorbida en el proceso de excitación se usa con objetivo analítico, ya que la espectrofotometría es un método cuantitativo y cualitativo, de análisis químico, que utiliza la luz para medir la concentración de las sustancias químicas, en el caso que planteas como las proteínas.
Además por la Ley de Bourguer- Lambert- Beer "La absorbancia y la concentración de las especies absorbentes tienen relación líneal" es decir "A mayor concentración, mayor luz absorbida".

Hay una dependencia directa entre la longitud de onda y la absorbancia.

Por todo esto, que lo traté de hacer sintético, se utiliza luz monocromática, que permita la absorción de la radiación para que luego se emita la luz( en el retorno) y el aparato detecte la radiacción y sea registrado.


Saludos.

Cynthia Gabriela
Bioquímica facultad de bioquímica, quí...
Escrito por Cynthia Gabriela
el 09/05/2010

El modo gráfico al que te refieres es la Curva Patrón o Curva de Calibración, en la cual previamente se debe realizar la Curva de Ringbom, es medio tedioso, ya que hay que hacer el análisis de regresión.
Hay otros métodos pero son específicos para casos particulares como lo es el Método del Patrón Cercano, en este se lo utiliza cuando siempre se determina la misma muestra, cuando se conoce más o menos la concentración que se tiene del compuesto.
También conozco del Método del Agregado Patrón, se usa cuando se presenta interferencia en la matriz de la sustancia que se quiere analizar, osea cuando la matriz es compleja.

Es más o menos de los métodos que se realizan en el laboratorio de análisis.

Saludos.

Carlos Alberto Farfan
Veracruz, México
Escrito por Carlos Alberto Farfan
el 25/06/2010

La longitud de onda seleccionada es consecuencia de la mejor respuesta del método a este ensayo, si realizas una medición de una muestra de concentración conocida a diferentes longitudes de onda en intervalos de 10 nm, encontraras que la absorbancia resultante presenta una curva caracteristica que se incrementa y posteriormente decrementa; y en el máximo valor se determina la longitud de onda óptima para operar el equipo.

En cuanto a otra forma más rápida, solo podría indicar el visual, donde tu preparas una serie de estandares en el intervalo de trabajo y le proporcionas color. Así a tu muestra le aplicas el mismo procedimiento y simplemente lo comparas con los patrones de trabajo elaborados y determinas su concentración aproximada. Este método sería aplicable, siempre y cuando proporciones color a la curva y muestra.